1) Da excelente tinción nuclear, lo que es básico para el diagnóstico de las células malignas.
2) Consigue una adecuada transparencia citoplasmática, permitiendo estudiar los frotis citológicos que
siempre presentan superposición celular.
3) Las diferentes tonalidades citoplasmáticas ayudan a reconocer diversos subtipos celulares y
favorecen el diagnóstico diferencial de los tumores.
Esta tinción se inicia con la coloración nuclear, que se realiza con hematoxilina de Harris:
5 grs de Hematoxilina
100 grs de Sulfato de Potasio Aluminio(Alumbre Amoniacal).
2.5 grs de Óxido de Mercurio
50 ml de Etanol puro.
1000ml de H2O destilada.
La Hematoxilina es rápidamente oxidada a Hemateína producto de Alumbre amoniacal, formando un complejo Hemateína-Mordiente que interactúa con las proteínas básicas abundantes en el núcleo, otorgándoles patrones característicos de distribución cromatínica.
El proceso de tinción nuclear requiere que las placas de los extendidos hayan sido liberadas del citospray (fijadores);por esta razón la batería de tinción comienza con alcohol de 95° para extraer la laca, seguido de agua destilada, y del agua se pasa a la solución de hematoxilina de Harris. Las inmersiones en agua deben hacerse lentamente y con delicadeza para evitar el desprendimiento de células aisladas o en colgajos las cuales pueden contaminar otras placas.
También se debe tomar en cuenta el tiempo en que permanezcan los frotis en el agua ya que se producen artefactos como la sobrehidratación del mucus. En cuanto a la duración de la Tinción de Papanicolaou éste recomendó la tinción regresiva en donde se sobretiñen los núcleos por 5 a 10 minutos y luego se retira el exceso del colorante con lavados y soluciones de ácido clorhídrico al 0.5% de tal modo que los núcleos neoplásicos destaquen fuertemente por su hipercromasia como un elemento clave en el diagnóstico de malignidad.
Después de la hematoxilina se lavan en agua destilada preferentemente y se puede acelerar la diferenciación con Borax o Carbonato de Litio colocándose de color azul intenso y luego se vuelve a lavar; terminada la tinción nuclear comienza la citoplasmática que consiste en una tinción en base alcohólica gracias a la cual se obtiene la transparencia citoplasmática. En esta fase se utiliza Orange G y Eosina Azure.
La solución de Eosina Azure (EA) contiene Eosina Y, Verde Luz, Pardo Bismarck, Acido Fosfotúngstico y Alcohol etílico. Diversas concentraciones de éstos compuestos dieron origen a los EA 25;EA 36 y el actualmente EA 50 que no contiene pardo Bismarck por que experimentalmente se observó que no aportaba nada a la tinción en el espectro de luz visible. Los colorantes EA son alcohólicos pero también existen acuosos.
Antes
Después
Fuente: ©2003. Alumnos de la Mención Morfofisiopatología y Citodiagnóstico. Escuela de Tecnología Médica. Facultad de Medicina. Universidad de Chile.
No hay comentarios.:
Publicar un comentario